歐際醫藥依托擁有實驗動物使用許可證的實驗動物中心進行合作，為您提供主要包括模型制備、受試物給藥、標本采集、功能指標檢測等技術服務。

服務目錄號：#OGF-002

服務項目：有助于抗氧化

服務內容：

1.選用10 月齡以上老齡大鼠或 8 月齡以上老齡小鼠，也可用氧化損傷模型鼠。

2.推薦用單一性別，小鼠每組10－15 只，大鼠 8－12 只。

3.實驗設三個劑量組和一個溶劑對照組，以人體推薦量的10 倍（小鼠）或 5 倍（大鼠）為其中的一個劑量組，另設兩個劑量組，高劑量一般不超過 30 倍，必要時設陽性對照組、空白對照組。受試樣品給予時間30 天，必要時可延長至 45 天。

4.器/體重比值測定：胸腺/體重比值，脾臟/體重比值。

5.結果判定：3 個劑量組給予不同濃度受試樣品，對照組給予同體積溶劑，實驗結束時處死動物測脂質氧化產物含量、蛋白質羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。

客戶提供：受試樣品、陽性對照品

歐際提交：詳細研究報告

服務周期：3個月

服務目錄號：#OGF-002-1

模型名稱：D －半乳糖氧化損傷模型

D-半乳糖供給過量，超常產生活性氧，打破了受控于遺傳模式的活性氧產生與消除的平衡狀態，引起過氧化效應。選 25－30g 健康成年小鼠，除空白對照組外，其余動物用 D-半乳糖 40mg－1.2g/kg BW 頸背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量為 0.1mL/10g，每日 1 次，連續造模 6 周，取血測 MDA，按 MDA 水平分組。隨機分為 1 個模型對照組和 3 個受試樣品劑量組，3 個劑量組經口給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，在給受試樣品的同時，模型對照組和各劑量組繼續給予相同劑量 D-半乳糖頸背部皮下或腹腔注射，實驗結束處死動物測脂質氧化產物含量、蛋白質羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。

服務目錄號：#OGF-002-2

模型名稱：乙醇氧化損傷模型

乙醇大量攝入，激活氧分子產生自由基，導致組織細胞過氧化效應及體內還原型谷胱甘肽的耗竭。選25－30g 健康成年小鼠（180－220g 大鼠），隨機分為 4 個組，1 個模型對照組和 3 個受試樣品劑量組，必要時可增設 1 個空白對照組。3 個劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對照組給予同體積溶劑，連續灌胃

30 天，末次灌胃后，模型組對照組和 3 個劑量組禁食 16 小時（過夜），然后 1 次性灌胃給予 50%乙醇 12mL/kgBW，6 小時后取材（空白對照組不作處理，不禁食取材），測血清或肝組織脂質氧化產物含量、蛋白質羰基含量、還原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。

服務目錄號：#OGF-002-3

模型名稱：脂質氧化產物測定

血中過氧化脂質降解產物丙二醛（MDA）含量可采用熒光法和比色法測定，方法任選其一。

將10nmol/mL 四乙氧基丙烷，用雙蒸水稀釋成 0.0、0.25、0.5、1.0、1.5、2、3、5、10nmol/mL 分別取0.1mL 加入酸水解液 2mL、TBA 工作液 0.5mL→混勻，避光、沸水浴 60min→流水冷卻至室溫→3mL 正丁醇振蕩抽提 1min→3000r/min 離心 5min→取上清液（正丁醇層）測熒光強度（入射狹縫 1.5nm，出射狹縫 5nm，

激發波長536nm，發射波長 550nm）以四乙氧基丙烷濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖。

服務目錄號：#OGF-002-4

模型名稱：比色法

MDA（malondiadehycle）是細胞膜脂質過氧化的終產物之一，測其含量可間接估計脂質過氧化的程度。1 個丙二醛（MDA）分子與 2 個硫代巴比妥酸（TBA）分子在酸性條件下共熱，形成粉紅色復合物。該物質在波長 532nm 有極大吸收峰。可用分光光度法進行測定。組織勻漿樣品：取一定量的所需臟器，生理鹽水沖洗、拭干、稱重、剪碎，置勻漿器中，加入 0.2M 磷酸鹽緩沖液，以 20000r/min 勻漿 10s，間歇 30s，反復進行 3 次，制成 10%組織勻漿（W/V），3000r/min 離心5－10min，取上清液待測。

服務目錄號：#OGF-002-5

模型名稱：蛋白質氧化產物測定

H 2 O 2 或 O 2 ·ˉ自由基對蛋白質氨基酸側鏈的氧化可導致羰基產物的積累。羥自由基也可直接作用于肽鏈，使肽鏈斷裂，引起蛋白質一級結構的破壞，在斷裂處產生羰基。羰基化蛋白極易相互交聯、聚集為大分子從而降低或失去原有蛋白質的功能，蛋白質羰基含量可直接反映蛋白質損傷的程度。蛋白質羰基形成是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志，它隨著年齡的增長而增加。

取0.1g 組織，在冰的生理鹽水中漂洗，以去掉表面的血跡。加入 0.9mL 的冰的 10 mmol/L HEPES 緩沖液（pH7.4），制成 10%的勻漿。將勻漿液以 3000r/min 的轉速，離心 10 min，保留上清。取 100g/L 的硫酸鏈霉素溶液 50μL，加入上清液 450μL（v/v,1:9），室溫放置 10 min 后，以 11000r/min 的轉速，離心 10 min，取上清液待測。

服務目錄號：#OGF-002-6

模型名稱：抗氧化酶活力測定

SOD 催化超氧陰離子自由基（O 2 ·ˉ）生成 H 2 O 2 ，再由其它抗氧化酶如谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶作用生成水，這樣可以清除 O 2 ·ˉ對細胞的毒害作用。SOD、GSH-Px 在動物某些器官和人體血紅細胞中的含量均有明顯的增齡變化，酶活性與生物年齡的增長成反比。消除自由基的能力與酶活性成正比。1.3.6.1 血或組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力測定。

溶血液：取鼠血10μL 加入到 1mL 雙蒸水中，充分振搖，使之全部溶血 1:100 待測，4h 內測定酶活力。若當天來不及測定，將肝素抗凝全血置-20℃凍存，3d 內測定，若 4℃存放，28h 內必須測完。測前取出樣品室溫自然解凍。

組織上清液：動物禁食過夜，處死后，立即取出所需臟器，放入冷生理鹽水中洗去浮血，剔除脂肪及結締組織，濾紙吸干后，在冰浴上剪成碎塊，稱取適量組織，加冷0.2M 磷酸緩沖液，以 20000r/min 勻漿 10s，間歇 30s，反復 3 次制成 5%組織勻漿，操作在冰浴中進行，勻漿以 12500×g 離心 10min（低溫高速離心機），

以沉淀為破碎的細胞、細胞碎片、核及線粒體，上清液用以測胞液中的酶活力，最好當天測，否則加20%（v/v）甘油分裝于塑料管，放置-20－-80℃，可保存數周，而酶活力不減。1.3.6.2.3.2 GSH 標準曲線的制作：取 1.0mmol/LGSH 溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于 10mL 小容器瓶中，各加入偏磷酸沉淀劑 8mL，用雙蒸水稀釋至 10mL 刻度，即得到濃度為 0、20、40、60、80、100μmol/L 的 GSH 標準液。取上述不同濃度標準液各 2mL，放入試管中，加入 0.32mol/L Na 2 HPO 4 2.5mL，比色前加入 DTNB 顯色液 0.5mL 用光徑 1cm 杯，5min 內在可見光 423nm 波長測 OD 值，以雙蒸水調零點。以 GSH 含量（μmol/L）為橫坐標，OD 423 值為縱坐標，繪制標準曲線。

服務目錄號：#OGF-002-8

模型名稱：抗氧化物質還原型谷胱甘肽（GSH）

谷胱甘肽是一種低分子清除劑，它可清除O 2 - 、H 2 O 2 、LOOH。谷胱甘肽是谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的一種三肽，是組織中主要的非蛋白質的巰基化合物，是 GSH-Px 和 GST 兩種酶類的底物，為這兩種酶分解氫過氧化物所必需，它能穩定含巰基的酶，和防止血紅蛋白及其它輔助因子受氧化損傷，缺乏或耗竭 GSH會促使許多化學物質或環境因素產生中毒作用，GSH 量的多少是衡量機體抗氧化能力大小的重要因素。

溶血液上清液：取0.1mL 抗凝全血加雙蒸水 0.9mL（1：9 溶血液），充分混勻，直至透亮為止。取溶血液 0.5mL 加 4%磺基水楊酸 0.5mL 混勻，室溫下 3500rpm 離心 10 分鐘，取上清液備用。血清上清液：取 0.1mL 血清加 4%磺基水楊酸 0.1mL 混勻，室溫下 3500rpm 離心 10 分鐘，取上清液備用。組織上清液：取組織 0.5g 加生理鹽水 4.5mL 充分研磨成細漿（10%肝勻漿），混勻后取漿液 0.5mL 加 4%磺基水楊酸 0.5mL 混勻，室溫下 3500rpm 離心 10 分鐘，取上清液備用。

服務目錄號：#OGF-002-9

模型名稱：血中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px ）活力測定

谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是體內存在的一種含硒清除自由基和抑制自由基反應的系統。對防止體內自由基引起膜脂質過氧化特別重要，其活力以催化 GSH 氧化的反應速度，及單位時間內 GSH 減少的量來表示，GSH 和 5，5’-二硫對硝基苯甲酸（DTNB）反應在 GSH-Px 催化下可生成黃色的 5-硫代 2-硝基苯甲酸陰離子，于 423nm 波長有最大吸收峰，測定該離子濃度，即可計算出 GSH 減少的量，由于 GSH 能進行非酶反應氧化，所以最后計算酶活力時，必須扣除非酶反應所引起的 GSH 減少。

溶血液：取血20μL 加入到 1mL 雙蒸水中，充分振搖，使之全部溶血 1:100 待測，4 小時內測定酶活力。若當天來不及測定，將肝素抗凝全血置-20℃凍存，3 天內測定，若 4℃存放，28 小時內必須測完。測前取出

樣品室溫自然解凍。